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用于免疫沉淀的 Dynabeads™ 蛋白 A為表面共價偶聯(lián)有重組蛋白 A (~45 kDa)的 2.8 µm 均勻超順磁性微珠。
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•在不到40分鐘內(nèi)完成 IP
• 高靶蛋白得率和低抗體消耗
• 極低非特異性結(jié)合及高信噪比
• 無需色譜柱、離心步驟或耗時的預清洗步驟
•高重現(xiàn)性和高通量與 KingFisher 儀器兼容
可快速且簡便的進行手動 Dynabeads 分離
手動方案簡單且可在40分鐘內(nèi)完成。首先,將靶蛋白的抗體與 Dynabeads 蛋白 A 在試管中孵育 10 分鐘。通過將試管置于 DynaMag 磁力架中并去除上清液,洗去過量抗體。然后,抗體包被磁珠可用于多種下游應用,包括 IP、Co-IP、染色質(zhì) IP (ChIP)、RNA IP (RIP)、小規(guī)模 IgG 純化和蛋白純化。由于 Dynabeads 的磁性,使用 DynaMag 磁力架可輕松收集結(jié)合材料。微珠上的重組蛋白 A 不含白蛋白結(jié)合位點,因此在程序中不會共純化白蛋白。IP 速度快,并且具有高得率、高重現(xiàn)性且非特異性結(jié)合極少,因此無需預清洗步驟。
自動 Dynabeads 分離有助于提高通量并縮短手動操作時間
如果您并行處理多份樣品,洗滌步驟數(shù)量和手動操作時間會與樣品數(shù)量成比例地增加。一次處理多個樣品時,移液管及其他手動操作獲得的結(jié)果往往不如自動化。為了更好地處理中等至高通量的樣品,減少手動操作時間并確保可重現(xiàn)性較高,我們開發(fā)了適用于 KingFisher Flex 和 KingFisher Duo Prime 儀器的 IP 方案。自動化方案復制人工方案,從而獲得同樣高的靶蛋白產(chǎn)率以及相同的低非特異性結(jié)合和高可重現(xiàn)性。無論您要處理 10 個還是 96 個樣品,IP 方案可在 40 分鐘內(nèi)完成?!恍鑼⒃噭┘虞d到孔板上,按下“開始"按鈕,到您準備好下游分析時,IP 即可完成。根據(jù)抗體和靶蛋白的豐度和/或特異性,可能需要進行一些優(yōu)化(例如,孵育時間)。
•KingFisher Duo 儀器適用于低至中通量(1-12 份樣品/運行)
•KingFisher Flex 儀器適用于高通量(12-96 份樣品/運行)
參見自動方案
觀看有關(guān) KingFisher Flex 的視頻
溫和分離可盡可能減小對蛋白的物理應力
用于 Dynabeads 蛋白 A 的磁性分離技術(shù)快速且溫和,可盡可能減小對靶蛋白的物理應力。這允許分離和濃縮不穩(wěn)定的復合物,否則在長時間孵育期間可能會被蛋白酶解離或被其破壞。保存天然蛋白構(gòu)象和大蛋白復合物。
結(jié)合強度和結(jié)合能力
Dynabeads 蛋白質(zhì) A 可以分離大多數(shù)哺乳動物的免疫球蛋白(Ig)。捕獲的 Ig 量取決于起始樣品中 Ig 的濃度以及 Ig 的類型和來源。100µL Dynabeads 蛋白 A 將從每毫升含有 20–200µg IgG 的樣品中分離出約 25–30 µg 人 IgG。絕大部分位點與 Fc 結(jié)合,實現(xiàn)優(yōu)化的 Ig 取向??贵w與微珠的光滑外表面結(jié)合,因而不會像與基于 Sepharose/瓊脂糖的微珠結(jié)合時一樣吸附在大孔中。所有抗體都可用于蛋白結(jié)合,因此,僅需加入少量抗體,靶蛋白得率依舊很高。光滑磁珠表面也實現(xiàn)了 Dynabeads 出色的低非特異性結(jié)合能力。
不用于人體,僅用于科研