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Diapharma C1酯酶抑制劑:用于測定樣品中的C1-INH。c1-酯酶抑制劑(C1-INH)是一種調(diào)節(jié)蛋白,在補(bǔ)體系統(tǒng)、激肽激酶-激肽系統(tǒng)、凝血級聯(lián)和纖維蛋白溶解中作為多種si氨酸蛋白酶的抑制劑。
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產(chǎn)品描述:用于測定樣品中的C1-INH。Diapharma C1酯酶抑制劑(C1-INH)是一種調(diào)節(jié)蛋白,在補(bǔ)體系統(tǒng)、激肽激酶-激肽系統(tǒng)、凝血級聯(lián)和纖維蛋白溶解中作為多種si氨酸蛋白酶的抑制劑。
檢測原理:
血漿樣品的試驗程序制備:
血漿分離:將9份靜脈血和1份檸檬酸鈉溶液(0.11 mol/L)混合,在RCF至少為2500(對應(yīng)于DIN 58905)下離心15分鐘。血漿樣品在室溫下的保存不得超過3小時,否則樣品離心后必須立即冷凍。
樣品制備:在檢測前,用樣品緩沖液A按1:11(0.05 mL樣品+ 0.50 mL緩沖液A)的比例稀釋血漿樣品。C1-INH活性>為125%的樣品應(yīng)稀釋1:22。
試劑制備:所有的試劑,包括蒸餾水,在使用前都應(yīng)達(dá)到室溫。凍干試劑溶解在所示體積的蒸餾水中,10分鐘后即可使用。對于標(biāo)準(zhǔn)化測試,建議重建時間為30 min
性能測試:
c1-酯酶和稀釋后的樣品室溫保存,底物-緩沖混合物+為37°C.測量將在+37處進(jìn)行°C.
將底物C1-1與反應(yīng)緩沖液B混合:
移液方案:將吸管放入塑料管或試管中。
在炎癥過程中,急性期蛋白C1-INH的活性可能遠(yuǎn)高于正常值。建議再次檢測取值超過125%的C1-INH的樣品,稀釋率為1:22。
分析結(jié)果:
為了建立參考曲線,準(zhǔn)備了3個連續(xù)稀釋的凝血參考液,并與一個可選的空白(樣品緩沖液a)讀數(shù)一起進(jìn)行測試。
用樣品緩沖液A(0.05 mL血漿+ 0.50 mL緩沖液A)預(yù)稀釋凝血參考文獻(xiàn)1:11。從該預(yù)稀釋液中制備一系列稀釋液(1:1、1:2、1:1:4),同時使用樣品緩沖液A(1:1稀釋液對應(yīng)1:11預(yù)稀釋液)。該系列應(yīng)以與分析中的樣品相同的方式進(jìn)行測試。吸收增加(?A/min)繪制在線性圖表紙上,作為125、62.5和31.25 % C1-INH值的讀數(shù),并繪制給出線性校準(zhǔn)曲線。空白讀數(shù)可作為0 % C1-INH值。
對照等漿凝血對照A和N用樣品緩沖液A預(yù)稀釋1:11(0.05 mL等漿+ 0.50 mL緩沖液A),可以直接從參考曲線中讀出。這些值應(yīng)在對照血漿標(biāo)簽上的置信范圍內(nèi)。
示例:
對于非1:11稀釋的樣品,從校準(zhǔn)曲線中讀出的%活性必須進(jìn)行如下轉(zhuǎn)換:
因此,在1:22稀釋的樣品中,C1-INH活性是從校準(zhǔn)曲線中讀出的值的兩倍。
注意事項:
-僅用于研究
-所有的血液和血漿樣本和產(chǎn)品必須被視為具有潛在的傳染性,并以適當(dāng)?shù)淖o(hù)理和符合現(xiàn)行的生物安全法規(guī)進(jìn)行處理,并必須以與醫(yī)院廢物相同的方式進(jìn)行處理。
-每個單個供體血漿和每批凝血對照檢測,發(fā)現(xiàn)HbSAg、HIV 1/2抗體和HCV抗體呈陰性。然而,應(yīng)采取普遍的預(yù)防措施(將所有的人源材料視為具有潛在的傳染性)。
儲存條件
重組后的穩(wěn)定性:
重組試劑在反應(yīng)溫度下可穩(wěn)定6小時。
重組試劑可保存在-20°C。這些小瓶只能冷凍一次。
在儲存時,蓋子應(yīng)擰緊。冷凍試劑應(yīng)在一個月內(nèi)使用。
不要凍結(jié)底物-緩沖液混合物