酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（enzyme linked immunosorbent assay，簡(jiǎn)寫(xiě)ELISA）指將可溶性的抗原或抗體結(jié)合到聚苯乙烯等固相載體上，利用抗原抗體特異性結(jié)合進(jìn)行免疫反應(yīng)的定性和定量檢測(cè)方法。ELISA是分子生物學(xué)、免疫學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)研究中常用到的實(shí)驗(yàn)操作之一，一起來(lái)了解一下ELISA實(shí)驗(yàn)的具體步驟吧！

1. 涂覆：將待檢測(cè)的抗原或抗體溶液加入到微孔板（通常是96孔板）中，并在孔板表面上形成一層固定的抗原或抗體。這個(gè)過(guò)程被稱(chēng)為涂覆。

2. 阻斷：為了防止非特異性結(jié)合，需要在涂覆后加入一種阻斷劑，例如牛血清蛋白（BSA）或牛奶粉，以覆蓋孔板上未被固定的表面。阻斷劑可以減少非特異性結(jié)合和降低背景信號(hào)。

3. 樣品加入：將待測(cè)樣品加入到微孔板中，樣品中的目標(biāo)抗原或抗體與固定在孔板上的抗體或抗原相互作用。

4. 洗滌：通過(guò)反復(fù)洗滌孔板，去除未結(jié)合的物質(zhì)，以減少背景信號(hào)。

5. 探針加入：加入與待測(cè)物體特異性結(jié)合的酶標(biāo)記二抗（例如辣根過(guò)氧化物酶-HRP）或酶標(biāo)記抗原，使其與樣品中的目標(biāo)物體結(jié)合。

6. 洗滌：再次洗滌孔板，去除未結(jié)合的酶標(biāo)記物。

7. 底物加入：加入一種底物，其與酶標(biāo)記物相互作用，產(chǎn)生可測(cè)量的信號(hào)。常用的底物是一種可被酶催化產(chǎn)生顏色或熒光的物質(zhì)。

8. 反應(yīng)停止：通過(guò)加入一種停止劑，停止底物的反應(yīng)，阻止信號(hào)進(jìn)一步增加。

9. 信號(hào)測(cè)量：使用光譜儀或熒光測(cè)量?jī)x測(cè)量底物反應(yīng)產(chǎn)生的信號(hào)，根據(jù)信號(hào)的強(qiáng)度來(lái)確定樣品中目標(biāo)物體的濃度。

本期內(nèi)容：ELISA實(shí)驗(yàn)的具體步驟

下期內(nèi)容：ELISA空白背景高的常見(jiàn)原因和處理方法